Tekućinska kromatografija visoke učinkovitosti uglavnom uključuje sustav za ubrizgavanje, sustav za infuziju, sustav za odvajanje, sustav za otkrivanje i sustav za obradu podataka. U nastavku će biti predstavljeni njihovi sastavi i karakteristike.
1. Sustav ubrizgavanja općenito koristi membranski injektor ili visokotlačnu komoru za ubrizgavanje za dovršetak operacije ubrizgavanja, s konstantnim volumenom ubrizgavanja. Ovo je korisno za poboljšanje ponovljivosti analize uzorka.
2. Infuzijski sustav sastoji se od tri dijela: visokotlačne pumpe, spremnika mobilne faze i mjerača gradijenta. Opći tlak visokotlačne pumpe je l. 47-4.4X107Pa, podesiva i stabilna brzina protoka. Kada visokotlačna mobilna faza prolazi kroz kromatografsku kolonu, može smanjiti učinak difuzije uzorka unutar kolone, ubrzati brzinu kretanja unutar kolone, poboljšati stupanj odvajanja i oporaviti uzorak. Koristan za održavanje biološke aktivnosti uzorka. Pogreška skladištenja mobilne faze i analizator gradijenta mogu promijeniti mobilnu fazu u skladu sa svojstvima stacionarne faze i uzorka, uključujući promjenu polariteta, ionske jakosti i pH vrijednosti eluensa ili korištenjem konkurentskih inhibitora ili sredstava za denaturaciju. To omogućuje učinkovito odvajanje više tvari, čak i ako postoji samo jedan skup razlika ili izomera.
3. Sustav za odvajanje uključuje kromatografske kolone, spojne cijevi, termostate itd. Duljina kromatografske kolone općenito je 10-50 cm (ako su potrebne dvije, između njih se može dodati spojna cijev), s unutarnjim promjerom od 2-5 mm, izrađen od visokokvalitetnog nehrđajućeg čelika ili staklene cijevi debelih stijenki ili legure titana. Postoji fiksna faza s veličinom čestica od 5-10 μ m (sastavljena od matrice i fiksativa). Matrica u stacionarnoj fazi izrađena je od smole ili silikagela visoke mehaničke čvrstoće, koji imaju inertnost (kao što je alkalni silikagel uklonjen), poroznost (veličina pora do 1000?) i veliku specifičnu površinu. Oni su mehanički obloženi za spajanje (slično pripremi stacionarnih faza plinske kromatografije) ili kemijski povezani s različitim genima (kao što su fosfat, kvaterni amino, hidroksimetil, fenil, amino ili različite duljine alkilnog lanca ugljika) ili ligand organski spojevi . Dakle, ova fiksna relativna struktura ima dobru selektivnost. Na primjer, nakon spajanja aglutinina graška (PSA) na površini poroznog silikagela, mogu se izolirati glikoproteini u fibroblastima. Osim toga, plazmid baziran na stacionarnoj fazi je malen i sloj kolone je lako postići jednolično i gusto stanje. Lako je smanjiti učinak difuzije vrtložnih struja. Veličina čestica matrice je mala, mikropore su plitke, a prijenos mase uzorka u mikroporoznom području je kratak. To je korisno za smanjenje propusnosti i poboljšanje razlučivosti. Prema analizi teorije učinka kolone, što je manja veličina čestica matrice i veći je teorijski broj N ploče. Ovo dodatno dokazuje da što je manja veličina čestica matrice, to je veći stupanj odvajanja. Osim toga, termostati za tekućinsku kromatografiju visoke učinkovitosti mogu prilagoditi temperaturu od sobne temperature do 60 stupnjeva, skraćujući vrijeme analize povećanjem brzine prijenosa mase. Može poboljšati učinkovitost kromatografske kolone.
4. Često korišteni detektori za HPLC sustave detekcije uključuju ultraljubičaste detektore, detektore indeksa loma i fluorescentne detektore.
(1) UV detektor prikladan je za detekciju uzoraka s apsorpcijskim karakteristikama pod ultraljubičastim (ili vidljivim) svjetlom. Njegove karakteristike: širok raspon primjene (kao što su proteini, nukleinske kiseline, aminokiseline, nukleotidi, peptidi, hormoni itd.); Visoka osjetljivost (granica detekcije od 10-10g/ml); Široki linearni raspon; Nije osjetljiv na promjene temperature i protoka; Može otkriti uzorke eluirane gradijentnim otopinama.
(2) Diferencijalni detektor indeksa loma može se koristiti za otkrivanje svih komponenti uzorka s indeksima loma koji se razlikuju od onih detektiranih detektorom mobilne faze. Trenutačno se većina spojeva ugljikohidrata detektira ovim sustavom detekcije. Sustav ima snažnu univerzalnost i jednostavan rad, ali nisku osjetljivost (granica detekcije od 10-7g/ml), a promjene u mobilnoj fazi mogu uzrokovati promjene u indeksu loma. Stoga nije prikladan ni za analizu tragova niti za detekciju uzoraka elucije gradijenta.
(3) Detektor fluorescencije prikladan je samo za određivanje fluorescentnih organskih spojeva (kao što su policiklički aromatski ugljikovodici, aminokiseline, amini, vitamini i određeni proteini) pod određenim uvjetima, na temelju intenziteta fluorescencije i koncentracije emitirane svjetlosti. Njegova je osjetljivost vrlo visoka (granica detekcije je 10-12~10-14g/ml), a može se koristiti za analizu tragova i detekciju u radu s gradijentnom elucijom.
5. Sustav za obradu podataka može prikupiti, pohraniti, prikazati, ispisati i obraditi testne podatke za odvajanje uzoraka i može ispravno izvršiti pripremu ili rad na identifikaciji